由于急性髓细胞白血病（AML）的长期预后不理想，因此需要更有效的靶向治疗和新的联合治疗方案。近日，东南大学附属中大医院葛峥教授团队在国际知名学术杂志Experimental Hematology & Oncology发表文章Synergistic effect of HDAC inhibitor Chidamide with Cladribine on cell cycle arrest and apoptosis by targeting HDAC2/c-Myc/RCC1 axis in acute myeloid leukemia，通过临床前研究，为AML的治疗提供了一种潜在的高效治疗方案——西达本胺联合克拉屈滨方案，有望为AML的治疗带来突破。
急性髓系白血病（AML）是一组异质性恶性血液病，其前体细胞自我更新、增殖能力增强，分化能力下降，目前AML领域新药/新方案进展较为缓慢，标准的3+7诱导方案后，即便达到完全缓解（CR）、仍有超过50%的患者最终会复发。
组蛋白去乙酰化酶抑制剂（HDACi）是一组表观遗传调节剂，已被证明在AML中具有抗白血病作用。西达本胺（CHI）是一种新的亚型选择性HDACi，可以在低浓度下选择性抑制I类（HDAC1、2和3）和IIb类（HDAC10） HDAC的活性，已被批准用于治疗外周T细胞淋巴瘤。据报道，在AML中，CHI可以单独或与其他药物联合抑制细胞增殖，诱导G0/G1阻滞，增加细胞凋亡和化学敏感性。
克拉屈滨（CLA）是一种嘌呤核苷抗代谢类似物，通过嘌呤核苷补救途径代谢。CLA三磷酸（CLA的磷酸化代谢产物）结合到DNA中，导致DNA单链断裂，并引发细胞凋亡，被开发用于治疗血液恶性肿瘤。
用不同剂量的CHI处理AML细胞系U937、THP-1和MV4-11，结果显示CHI以剂量和时间依赖的方式抑制细胞活力。与对照组相比，CHI显著增加U937细胞中G0/G1期的百分比（对照组:39.04±0.85%对CHI 4μm:83.79±0.85%，p < 0.001与CHI 8 μM相比:91.44±0.65%，p < 0.001与CHI 16 μM相比:96.85±0.88%，p < 0.001），在THP-1和MV4-11细胞中也观察到类似的结果；另外，与对照组相比，CHI处理以剂量依赖性方式显著增加了AML细胞的凋亡率。
与单一药物对照相比，CHI联合克拉屈滨（CLA）对来自健康供者的PBMC的毒性作用没有显著增强；与单一药物或DMSO对照相比，CHI联合CLA显著抑制了AML细胞的增殖。CompuSyn分析显示该组合对AML细胞的增殖抑制具有协同作用。
与单一药物对照相比，CHI联合CLA显著增加了U937、THP-1和MV4-11中的G0/ G1期阻滞。定量数据显示，与DMSO对照相比，在U937（对照:46.79±0.43% vs. 62.27±0.88%，p < 0.001）、MV4-11（60.20±1.39% vs. 63.17±0.24%，p < 0.001）中，CLA在低剂量（0.02 μM）下显著诱导G0/G1期阻滞，但在THP-1细胞系中不诱导（49.95±0.52%）。WB进一步结果显示，与单一药物对照相比，CHI联合CLA显著增加了关键的细胞周期蛋白依赖性激酶抑制剂家族成员p21 Waf1/Cip1蛋白的水平，但是降低了G1向S细胞期进展的限速途径因子CDK2和细胞周期蛋白E2。
与单一药物对照相比，CHI联合CLA显著增加了THP-1（60.37±2.36%对28.24±0.39%，p < 0.01）、U937（21.29±0.66%对6.25±0.56%，p < 0.001）和MV4-11（17.43±0.26%对9.89±1.62%，p < 0.001）中的细胞凋亡，WB数据进一步显示该组合显著增加了凋亡相关蛋白（caspase-9、caspase-3和PARP）的表达。
通过转录组分析，发现c-Myc是联合治疗方案中的关键分子。与单一药物对照相比，CHI联合CLA显著抑制了AML细胞中的c-MYC表达，并且c-MYC敲低显著增加了U937细胞对该组合的敏感性。
co-IP分析结果显示，HDAC2可以在U937、THP1和MV4-11细胞中免疫沉淀c-Myc，而HDAC1不能。
RT-qPCR检测发现HDAC2在AML患者中高表达。进一步将入组的AML患者分为HDAC2 high组（最高25%，n = 20）和HDAC2 low组（最低75%，n = 57）。HDAC2 high组患者中-5/5q的比例远高于HDAC2 low组（20% vs. 3.5%，p < 0.05）。存活曲线显示，高表达HDAC2的患者，总存活率（OS）以及无复发存活率（RFS）更短，提示HDAC2高表达与不良预后相关。
通过分析造血干细胞和祖细胞的ChIP-seq数据，发现RCC1与c-MYC正相关。根据mRNA强度将AML患者分为RCC 1 high组（最高25%，n = 20）和RCC 1 low组（最低75%，n = 57）。诊断时，RCC 1 high组的骨髓原始细胞比RCC 1 low组高得多[72.4%（12.4–96.0） vs. 43%（6.05–94.8），p < 0.05]；诱导治疗后，RCC 1 high组的CR率显著低于RCC 1 low组（55.0%比84.2%，p < 0.05）；根据2017年ELA风险分层，RCC 1 high组的不良队列比例明显高于RCC 1 low组（70.0% vs. 33.3%，p < 0.05）；另外，RCC 1 high组中KMT2A重排（20.0% vs. 3.5%，p < 0.05）和复杂核型（37.5% vs. 5.4%，p < 0.05）的发生率显著更高。
存活曲线显示，与具有低RCC1的患者相比，具有高RCC1的患者与较短的OS显著相关，RFS也有类似但不显著的趋势。
与shCTL相比，c-MYC敲除显著降低了U937细胞系中的RCC1 mRNA水平。与DMSO对照以及单一药物相比，CHI联合CLA显著下调RCC1。通过JASPAR在线工具显示，c-Myc与RCC1的启动子显著结合，并且与单一药物对照相比，西达本胺联合方案显著降低了RCC1的启动子区域中的c-Myc结合。这些数据证实了RCC1是急性髓细胞白血病中c-Myc的下游效应子。
总之，这些数据表明CHI联合CLA通过靶向AML细胞中的c-Myc/RCC1信号传导来发挥其抗白血病作用。
在AML1-ETO融合、c-KIT突变、MLL-AF6融合、FLT3-ITD突变的AML患者和具有复杂核型的CMML-BP患者细胞实验证实，CHI联合CLA显著抑制了细胞生长并诱导原代细胞凋亡，并且CompuSyn分析显示该组合具有协同效应。
研究表明，西达本胺联合克拉屈滨通过靶向AML细胞中的HDAC2/c-Myc/RCC1信号传导，在细胞增殖停滞、细胞凋亡和细胞周期停滞方面具有协同效应。此研究结果为正在进行的关于西达本胺联合克拉屈滨治疗AML患者的临床试验（临床试验ID: NCT05330364）提供了临床前证据。
葛峥 教授
东南大学附属中大医院
东南大学血液病研究所所长
东南大学附属中大医院血液科科主任
江苏省医学会血液学分会副主任委员
江苏省医师协会血液科医师分会副会长
江苏省研究型医院学会白血病和MDS专委会主任委员
中国医师协会血液科医师分会委员
中国抗癌协会血液肿瘤中国MDS和MPN工作组专家委员
中国老年医学会血液学分会委员
中华中医药学会血液病分会常委委员
中国中西医结合学会血液学分会委员
南京医学会血液病分会副主任委员
东南大学血液病国际合作实验室主任
瑞典卡罗林斯卡医学院博士，美国宾夕法尼亚州立大学医学院兼职副教授
江苏省“333高层次人才工程”中青年领军人才